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      2. 文章詳情

        ELISA實驗中溫育需要注意的細節

        日期:2024-05-22 04:01
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        摘要:而溫育又是ELISA測定中影響測定成敗關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。擅自改變說明書操作,使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度,造成一些不必要的麻煩。因為,不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇,隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導致試驗結果出現偏差。因此,關于溫育,在實際測定操作中一定要注意以下幾點: 1、要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。具體的做法是,用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。 2、溫育溫度的選擇。我們建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。 3、“邊緣效應”的排除。使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地排除“邊緣效應”,并且可提高測定的重復性。 ?
        ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。
        在檢測時,受檢標本(測定其中的抗原)與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體,通過反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
        而溫育又是ELISA測定中影響測定成敗關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。擅自改變說明書操作,使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度,造成一些不必要的麻煩。因為,不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇,隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導致試驗結果出現偏差。因此,關于溫育,在實際測定操作中一定要注意以下幾點:
        1、要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。具體的做法是,用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。
        2、溫育溫度的選擇。我們建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。
        3、“邊緣效應”的排除。使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地排除“邊緣效應”,并且可提高測定的重復性。

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