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      2. 文章詳情

        蛋白質的分離純化的注意事項

        日期:2024-04-15 01:50
        瀏覽次數:140
        摘要:1.為了避免蛋白質變性,不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。 2.緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環。。 3.為了避免蛋白質的氧化,將0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇)加入到緩沖溶液中。 4.為了避免重金屬對目標蛋白的破壞,將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。 5.為了避免微生物生長,使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質的時候,均必須時刻對它的穩定性注意維護,使它的活性得到保護,需要牢記如下一些通用的注意事項。 6.盡可能置于冰上或者在冷庫內進行操作。 7.蛋白濃度不要太稀。 8.除非是進行聚焦層。否則pH需要合適,防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同,使蛋白質的沉淀得以避免。 9.使用蛋白酶抑制劑,避免蛋白酶對目標蛋白的降解;在純化細胞中的蛋白質時,將DNA酶加入來使得DNA降解,避免DNA對蛋白的污染。
        蛋白質的分離純化在生物化學研究應用中使用廣泛,是一項重要的操作技術。 一個典型的真核細胞可以包含數以千計的不同蛋白質,一些含量十分豐富,一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質,必須先將該蛋白質從其他蛋白質和非蛋白質分子中純化出來。那么純化的時候需要注意的細節是哪些呢?
        注意事項
        1.為了避免蛋白質變性,不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。
        2.緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環。。
        3.為了避免蛋白質的氧化,將0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇)加入到緩沖溶液中。
        4.為了避免重金屬對目標蛋白的破壞,將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
        5.為了避免微生物生長,使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質的時候,均必須時刻對它的穩定性注意維護,使它的活性得到保護,需要牢記如下一些通用的注意事項。
        6.盡可能置于冰上或者在冷庫內進行操作。
        7.蛋白濃度不要太稀。
        8.除非是進行聚焦層。否則pH需要合適,防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同,使蛋白質的沉淀得以避免。
        9.使用蛋白酶抑制劑,避免蛋白酶對目標蛋白的降解;在純化細胞中的蛋白質時,將DNA酶加入來使得DNA降解,避免DNA對蛋白的污染。
        上海通蔚生物科技有限公司擁有自己的實驗室,備有業的技術研發團隊,長期致力于各種生物試劑,細胞,血清,ELISA試劑盒的研發與銷售,實驗提供免費代測服務,并提供精湛的技術服務,如果您有實驗上的問題歡迎來咨詢,為您提供業的一對一技術指導。 
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